Regina Célia Pereira Marques
From Laboratório de Reparo de DNA
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Sou graduada em Ciências Biológicas pela Universidade do Estado do Rio Grande do Norte e mestre em Genética e Biologia Molecular pela Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Participei do sequenciamento do Genoma do Schistosoma mansoni e Aedes aegypti. Atualmente sou doutoranda pelo departamento de microbiologia da Universidade de São Paulo.
[editar] Resumo do ProjetoO projeto visa identificar genes envolvidos em reparo de DNA na proteobactéria, subdivisão alfa, Caulobacter crescentus através de uma abordagem genômica funcional. Para isso selecionamos mutantes dessa bactéria com sensibilidade a agentes genotóxicos (metil-metano-sulfonato e UV). Esses mutantes foram obtidos a partir de uma biblioteca de aproximadamente 5000 clones, mutada por inserção aleatória do transposon Tn5 (que inclui o gene kan , que dá resistência a kanamicina), e a abordagem foi realizada por testes em larga escala (96 clones testados a cada vez), e posterior confirmação do fenótipo (sensível ao agente genotóxico) individual. Genes contendo o inserto, Tn5, foram selecionados a partir do clone mutado através de clivagem do genoma bacteriano com enzima de restrição, subclonagem em plasmídeo e seleção com kanamicina. Sequenciamento de DNA a partir do DNA do transposon permitiu identificar as regiões flanqueadoras do tn5 e, portanto, a identidade do gene mutado. Pretendemos ainda identificar, através de análise bioinformática, genes novos que potencialmente estejam relacionadas a reparo de DNA em Caulobacter, muito embora não estejam descritos para Escherichia coli. Alguns candidatos já foram encontrados, entre eles uma ligase dependente de ATP, ligB, e uma nova DNA polimerase, dnaE2(Galhardo et al., 2005) e pretendemos, através de genética reversa- inativação do gene de interesse, identificar seu fenótipo quanto a sensibilidade a agente genotóxico e mutagencidade. Esta é, de nosso conhecimento, a primeira abordagem genômica para identificação de genes de reparo de DNA em bactérias, e a nossa expectativa é de que consigamos demonstrar a função de vários ortólogos já identificados em E.coli, além de identificar genes cuja função em reparo de DNA ainda não foi descrita. [editar] PublicaçõesMarinalva Martins-Pinheiro, Regina CP Marques, and Carlos FM Menck. Genome analysis of DNA repair genes in the alpha proteobacterium Caulobacter crescentus. BMC Microbiol. 2007; 7: 17. Verjovski-Almeida S ; DeMarco R ; Martins EA ; Guimaraes PE ; Kitajima JP ; Leite RA ; MARQUES, R. C. P. ; Soares MB ; Menck CF ; Dias-Neto E . Transcriptome analysis of the acoelomate human parasite Schistosoma mansoni.. Nature Genetics, Londres, v. 35, n. 02, p. 148-157, 2003. MARQUES, R. C. P. ; Batistuzzo -Medeiros S R ; Dias CS ; Barbosa-Filho JM ; Agnez-Lima LF . Evaluation of the mutagenic potential of yangambin and of the hydroalcoholic extract of Ocotea duckei by the Ames test.. Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis, v. 536, p. 117-120, 2003. [editar] Capítulos de livros publicados1. Menck CF ; Agnez-Lima LF ; Batistuzzo -Medeiros S R ; MARQUES, R. C. P. ;PINHEIRO, M. M. . Processos de Reparo de DNA:garantindo a estabilidade do material genético. In: Lúcia Regina Ribeiro; Daisy Maria Fávero Salvadori; Edmundo Kanan Marques. (Org.). Mutagênese Ambiental. 1a ed. Canoas/RS: Editora da ULBRA, 2003, v. 1, p. 21-347. |