Tomás de Paula e Silva

Estudante do oitavo semestre da Graduação em Ciências Biológicas no IB/USP, em período noturno, participa do Laboratório de Reparo desde novembro de 2006.

Projeto de Iniciação Científica apoiado pela FAPESP, sob orientação do prof. dr. Carlos Menck e co-orientação da dra. Tatiana Ortolan. O projeto utilizará a técnica de RNAi no estudo da regulação de respostas de células humanas primárias a danos por UVB.

Resumo do Projeto

Entre as respostas de células a danos genômicos, como os produzidos por irradiação ultravioleta, destacam-se o reparo do DNA e a apoptose, que permitem por um lado a restauração e por outro a eliminação de células danificadas. A decisão que separa esses diferentes destinos da célula ocorre por meio de complexas sinalizações, nas quais a proteína p53 apresenta um papel crucial. A regulação da atividade da p53 se dá na presença de lesões no DNA e por diversas alças de retroalimentação, das quais aquelas formadas com a proteína Mdm2 possuem grande importância e têm sido estudadas como possíveis alvos de terapias anti-tumorais.

O projeto destina-se inicialmente à caracterização das respostas à irradiação com luz ultravioleta (UVB) de fibroblastos humanos primários em cultura, provenientes de indivíduos normais e de portadores das síndromes Xeroderma Pigmentoso grupo C (XP-C) e Síndrome de Cockayne grupo B (CS-B), ambas resultantes de mutações em genes ligados ao reparo de DNA por excisão de nucleotídeos (NER), a principal via de remoção dos danos causados por UV. As respostas serão medidas em termos de viabilidade e morte por apoptose das células, utilizando para isso testes de metabolismo e de conteúdo de DNA celular. As respostas de células em confluência (em quiescência mitótica) e em sub-confluência serão comparadas.

Em seguida será otimizado um protocolo para transfecção dessas células com siRNA, com o qual será silenciada a produção de Mdm2 para a verificação dos efeitos resultantes nas mesmas respostas à irradiação UVB. A comparação com as respostas obtidas em células não tratadas permitirá investigar as funções da Mdm2 na regulação da resposta a danos no DNA.

A pesquisa proposta propicia, portanto, o desenvolvimento de protocolos experimentais de utilidade geral e uma melhor caracterização das funções da Mdm2 em importantes processos celulares.

Publicações

Carvalho H, Ortolan TG, Depaula T, Leite RA, Weinlich R, Amarante-Mendes GP, Menck CF (2008) Sustained activation of p53 in confluent nucleotide excision repair-deficient cells resistant to ultraviolet-induced apoptosis. DNA Repair 7(6):922-931. [[1]PubMed]