André Passaglia Schuch
From Laboratório de Reparo de DNA
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Desta forma, a proposta do presente trabalho consiste no desenvolvimento de um sistema capaz de avaliar os efeitos biológicos da radiação UV solar a partir dos danos provocados na molécula de DNA. Para determinar a média dos diferentes tipos de lesões de DNA formadas após as irradiações, são utilizadas enzimas de reparo de DNA (glicosilase e endonucleases) que reconhecem e clivam o sítio contendo uma lesão específica. Complementando estas análises, são realizados ensaios de freqüências de mutação e da taxa de inativação biológica de DNA através do uso da linhagem de E. coli MBL50 e do vetor pCMUT, que transporta o gene supF como alvo mutagênico. | Desta forma, a proposta do presente trabalho consiste no desenvolvimento de um sistema capaz de avaliar os efeitos biológicos da radiação UV solar a partir dos danos provocados na molécula de DNA. Para determinar a média dos diferentes tipos de lesões de DNA formadas após as irradiações, são utilizadas enzimas de reparo de DNA (glicosilase e endonucleases) que reconhecem e clivam o sítio contendo uma lesão específica. Complementando estas análises, são realizados ensaios de freqüências de mutação e da taxa de inativação biológica de DNA através do uso da linhagem de E. coli MBL50 e do vetor pCMUT, que transporta o gene supF como alvo mutagênico. | ||
Os resultados já obtidos durante o desenvolvimento do Projeto de Mestrado mostram claramente que há uma produção significante de dimeros de pirimidina (CPDs) após a exposição do Dosímetro de DNA em doses crescentes de radiação UVC, UVB, UVA e na luz solar, assim como, um aumento na indução da mutagênese e na taxa de inativação biológica de DNA. | Os resultados já obtidos durante o desenvolvimento do Projeto de Mestrado mostram claramente que há uma produção significante de dimeros de pirimidina (CPDs) após a exposição do Dosímetro de DNA em doses crescentes de radiação UVC, UVB, UVA e na luz solar, assim como, um aumento na indução da mutagênese e na taxa de inativação biológica de DNA. | ||
- | A diferença entre a indução de danos oxidativos e CPDs em DNA plasmidial exposto à luz solar é pequena, mas CPDs aparecem como sendo o tipo de lesão mais abundante. Através da quantificação da marcação de anticorpos anti-CPDs e anti-6-4 PPs (pirimidina 6-4 pirimidona fotoprodutos – 6-4 PPs) após exposições a luz solar, verificou-se uma proporção média de indução destas lesões de 3:1, respectivamente. Esta proporção também foi mantida pela abordagem com enzimas de reparo de DNA. | + | A diferença entre a indução de danos oxidativos e CPDs em DNA plasmidial exposto à luz solar é pequena, mas CPDs aparecem como sendo o tipo de lesão mais abundante, verificando uma proporção média de indução de lesões de 3 CPDs para 1 6-4 PPs (pirimidina pirimidona 6-4 fotoprodutos). |
- | Cepas de E. coli MBL50 mais sensíveis a UV (mutadas para os genes de reparo de DNA uvrA e/ou mutM) estão sendo construídas. Estas servirão como melhores indicadoras de mutagênese, aumentando a sensibilidade de detecção de mutações em relação aos dados obtidos até o momento com a cepa selvagem para reparo de DNA. Com essas bactérias, serão obtidos espectros de mutações induzidas no gene supF após a sua exposição às lâmpadas de UV aqui empregadas e também à luz solar. | + | |
- | Através da cooperação científica estabelecida entre o Laboratório de Reparo de DNA do Departamento de Microbiologia da USP e as Universidades de Rikkyo e de Takushoku, Japão, pretendem-se realizar exposições do sistema Dosímetro de DNA no ambiente em paralelo com o monitoramento contínuo da radiação UVB e UVA solar, que será iniciado após instalação de radiômetros de UVB e UVA solar no prédio do Instituto de Ciências Biomédicas II (ICB II – USP). | + | |
Portanto, com o uso deste dosímetro biológico in situ serão desenvolvidas amplas análises dos níveis de produção destas fotolesões de DNA, de seus resultantes efeitos biológicos e, principalmente, dos tipos de mutações induzidas por estas lesões diretamente no ambiente. | Portanto, com o uso deste dosímetro biológico in situ serão desenvolvidas amplas análises dos níveis de produção destas fotolesões de DNA, de seus resultantes efeitos biológicos e, principalmente, dos tipos de mutações induzidas por estas lesões diretamente no ambiente. | ||