Alessandra Pelegrini

From Laboratório de Reparo de DNA

Revisão de 15:54, 25 Novembro 2011; ver versão actual
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Possui bacharelado e licenciatura em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul (2005 e 2006 respectivamente) e mestrado em Biologia Celular e Molecular pela mesma instituição (2007). Está desenvolvendo o projeto de doutorado intitulado "O silenciamento da cinase humana Nek1 altera o reparo normal do DNA" sob orientação do professor Guido Lenz pelo Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular na Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Atualmente realiza estágio de doutoramento no Laboratório de Reparo de DNA, no Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, sob supervisão do professor Carlos Frederico Martins Menck.



Resumo do Projeto

O silenciamento da cinase humana Nek1 altera o reparo normal do DNA

A proteína humana Nek1 pertence a uma família de serina/treonina quinases caracterizadas pelo seu envolvimento no ciclo celular que estão presentes em diferentes organismos. Nos últimos anos, cada vez mais estudos estão se focando nessa família de proteínas devido sua relação com patologias do desenvolvimento e à suscetibilidade a tumores. A Nek1, por exemplo, parece estar envolvida na etiologia de duas síndromes hereditárias, a Doença Policística do Rim e a Síndrome de costela curta e polidactilia tipo Majewski. Entretanto, as bases moleculares que relacionam a deficiência dessa proteína a essas patologias não estão estabelecidas. Por isso, alguns estudos buscam entender a função da Nek1 e os achados mais promissores destacam seu papel na ciliogênesis e na resposta ao estresse genotóxico, sugerindo a Nek1 como uma molécula sensora de danos ao material genético e até mesmo participando ativamente de vias de reparo.
Em nosso trabalho, através do estudo de células silenciadas por RNA de interferência (figura 1), encontramos um retardo no reparo do DNA em células renais humanas quando tratadas com os agentes genotóxicos metil-metanosulfonato, peróxido de hidrogênio e cisplatina. Quando silenciadas para Nek1, as células não conseguem reparar principalmente as lesões do tipo crosslinks causadas pela cisplatina, como demonstrado através do ensaio cometa nas versões alcalina e neutra (Figura 2). Em vista disso, o objetivo desse projeto é investigar o papel da Nek1 em resposta a lesões causada pelo quimioterápico cisplatina, um indutor de pontes inter e intracadeia de DNA (crosslinks), tentando estabelecer a via de atuação dessa proteína.




western-blot demonstrando o silenciamento de Nek1 por shRNA nas linhagens trabalhadas


O Silenciamento da Nek1 altera o reparo normal do DNA de células expostas a Cisplatina. Células Hek293T Wild-type (WT) e silenciadas para Nek1 (KD) foram tratadas com cisplatina por 1h e após diferentes tempos de recuperação o cometa alcalino ou neutro foi realizado conforme descrito em Pelegrini et al., 2010.

Publicações

Pelegrini, A. L. ; Moura, D. J. ; Brenner, B. L. ; Ledur, P. F. ; Maques, G. P. ; Henriques, J. A. P. ; Saffi, J. ; Lenz, G. (2010). Nek1 silencing slows down DNA repair and blocks DNA damage-induced cell cycle arrest. Mutagenesis, 25,447-454. Gerhardt, D; Horn, A. P. ; Gaelzer, M. M. ; Frozza, R. L. ; Delgado-Cañedo, A. ; Pelegrini, A. L. ; Henriques, Amélia T. ; Lenz, G. ; Salbego, C. (2009). Boldine: a potential new antiproliferative drug against glioma cell lines. Investigational New Drugs, 27, 517-525. </center>

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