Determinação de Proteína (Bradford)
1. Fazer em placa de ELISA e ler a 595nm.
2. Diluicao padrao gama globulina (1,41 mg/ml):
35,5 ul + 464,5 ul agua -> 100 ug/ml
3. Curva padrao:
-----------------------------------------------------------
TUBO Gama globulina Agua Bradford ug de Gama
(100 ug/ml) globulina
-----------------------------------------------------------
1 20 ul 380 ul 100 ul 2,0
2 40 ul 360 ul 100 ul 4,0
3 60 ul 340 ul 100 ul 6,0
4 80 ul 320 ul 100 ul 8,0
5 100 ul 300 ul 100 ul 10,0
6 150 ul 250 ul 100 ul 15,0
Branco - 400 ul 100 ul 20,0
------------------------------------------------------------
OBS.: FAZER EM DUPLICATA!
4. Esperar a temperatura ambiente pelo menos 5 minutos e menos que 1 hora.
5. Leituras:
--------------------------------
TUBO A 595nm | A 595 nm
--------------------------------
1 |
--------------------------------
2 |
--------------------------------
3 |
--------------------------------
4 |
--------------------------------
5 |
--------------------------------
6 |
--------------------------------
Branco |
--------------------------------